【Προβλεπόμενη χρήση】

Το κιτ είναι μια φθορίζουσα PCR σε πραγματικό χρόνο ανιχνευτή TaqMan για την ποιοτική ανίχνευση νουκλεϊκού οξέος γονιδίων ORF1ab, N του 2019-nCoV σε στυλεό λαιμού, πτυέλων σε ασθενείς με υποψία συμπτωμάτων πνευμονίας και περιπτώσεων Clustering.

Τα αποτελέσματα των δοκιμών προορίζονται μόνο για κλινική αναφορά και δεν μπορούν να θεωρηθούν ως μόνο σημείο αναφοράς για την κλινική διάγνωση. Συνιστάται η πραγματοποίηση εκδηλωμένης ανάλυσης σχετικά με τα κλινικά συμπτώματα και άλλα εργαστηριακά αποτελέσματα.

Οι χειριστές θα πρέπει να έχουν εμπειρία επαγγελματικής κατάρτισης στη γονιδιακή ενίσχυση ή τη δοκιμή μεθόδων μοριακής βιολογίας και να διαθέτουν σχετικά προσόντα για εργαστηριακές λειτουργίες. Το εργαστήριο θα πρέπει να έχει εύλογες προφυλάξεις βιολογικής ασφάλειας και προστατευτικές διαδικασίες.

【Αρχή δοκιμής】

Σε αυτό το κιτ, οι εκκινητές και οι ανιχνευτές έχουν σχεδιαστεί για τις διατηρημένες και συγκεκριμένες περιοχές του ORF1ab, N του 2019-nCoV, αντίστοιχα. Η φθορίζουσα PCR χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ιικού RNA μετά από καθαρισμό νουκλεϊκού οξέος του δείγματος RNA.

Αυτό το κιτ δοκιμής χρησιμοποιεί τεχνολογία φθορισμού PCR σε πραγματικό χρόνο. Κατά τη διάρκεια της ενίσχυσης PCR, ο ανιχνευτής συνδέεται με το πρότυπο και η ομάδα αναφοράς άκρου 5' του ανιχνευτή διασπάται από το ένζυμο Taq (δραστηριότητα εξωνουκλεάσης 5'→3'). απομακρύνεται από την ομάδα σβέσης για να δημιουργήσει ένα φθορίζον σήμα. Η καμπύλη ενίσχυσης σε πραγματικό χρόνο σχεδιάζεται αυτόματα με βάση το ανιχνευόμενο σήμα φθορισμού και υπολογίζεται η τιμή Ct του δείγματος (Ο αριθμός των κύκλων που παρουσιάζονται όταν το σήμα φθορισμού σε κάθε σωλήνα αντίδρασης φθάσει το καθορισμένο όριο). Τα φθοροφόρα ερυθρά FAM, VIC και Texas χρησιμοποιούνται για τη σήμανση του γονιδίου ORF1ab, των ανιχνευτών γονιδίου N στο διάλυμα αντίδρασης. Με τη χρήση μίας δοκιμής, η ποιοτική ανίχνευση των δύο παραπάνω γονιδίων του 2019-nCoV μπορεί να πραγματοποιηθεί ταυτόχρονα.

Για να αποφευχθεί το ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα, το κιτ παρέχεται με εσωτερικό μάρτυρα (IC), το οποίο επισημαίνεται με ομάδα φθορισμού Cy5, που θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για την παρακολούθηση της διαδικασίας εκχύλισης και του διαλύματος αντίδρασης.

【Κύρια εξαρτήματα】

Σημείωση¹: Δεν είναι δυνατή η ανταλλαγή των διαφορετικών παρτίδων εξαρτημάτων.

Σημείωση²: Το κιτ δοκιμής δεν περιέχει αντιδραστήριο εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, παρακαλούμε προετοιμάστε το αντιδραστήριο πριν από τη χρήση.

1. Χειρισμός δειγμάτων

Προσθέστε 10 μL εσωτερικού μάρτυρα σε 200 μL θετικού και αρνητικού μάρτυρα, αντίστοιχα για την εκτέλεση της εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.

2. Προετοιμασία αντιδραστηρίου:

Προετοιμασία συστήματος: Πάρτε τον προεγκατεστημένο λυοφιλοποιητή ενίσχυσης νουκλεϊκού οξέος, που ακολούθησε ανοίγοντας τη θήκη μεμβράνης και φυγοκεντρήστε την αμέσως. Η ποσότητα δείγματος κάθε δοκιμής θα πρέπει να είναι τα πολλαπλάσια του 8 που περιέχουν έναν θετικό μάρτυρα και έναν αρνητικό μάρτυρα. Προσθέστε 35 μL νερό χωρίς νουκλεάση σε κάθε σωλήνα αντίδρασης.

3.Φόρτωση δείγματος:

Προσθέστε 5 μL δείγματος νουκλεϊκού οξέος προς δοκιμή, θετικό μάρτυρα, αρνητικό μάρτυρα ότι ολόκληρος ο όγκος της αντίδρασης είναι 40 μL στο εκχωρημένο διάλυμα αντίδρασης. γιατί δεν χρειάζεται ένα λεπτό μείγμα και απλώς κλείστε το καπάκι του σωλήνα αντίδρασης PCR, φυγοκεντρήστε το υγρό στο τοίχωμα του σωλήνα στο κάτω μέρος του σωλήνα, επεξεργαστείτε έτσι την ενίσχυση PCR.

Μετά την επαλήθευση, εκτιμάται ότι η προσθήκη 5μL-10μL παραφινελαίου στο σύστημα PCR δεν θα επηρεάσει το αποτέλεσμα της PCR, αλλά θα αποφύγει τη μόλυνση και την εξάτμιση του υγρού.